จากเด็กหนุ่มกำพร้าที่ดูธรรมดา วันหนึ่งชีวิตของ ปีเตอร์ พาร์กเกอร์ ก็เปลี่ยนไปตลอดกาล เมื่อถูกแมงมุมกลายพันธุ์กัด เขาตื่นขึ้นมาพร้อมพลังเหนือมนุษย์ ทั้งความเร็ว ความแข็งแกร่ง และสัญชาตญาณแบบนักล่า ขณะต้องรับมือกับการสูญเสียครั้งใหญ่ เขาจึงเรียนรู้คำสอนอันเป็นตำนานว่า “พลังที่ยิ่งใหญ่ มาพร้อมความรับผิดชอบอันใหญ่ยิ่ง” ก่อนจะลุกขึ้นสวมหน้ากาก “ไอ้แมงมุม” ต่อสู้กับอาชญากรรมและเผชิญหน้ากับวายร้าย กรีนก็อบลิน เพื่อปกป้องนิวยอร์กและคนที่เขารัก