เมื่อปี 1938 “อินเดียน่า โจนส์” ได้ทราบข่าวว่าพ่อของเขา “ดร.เฮนรี่ โจนส์” หายตัวไปในขณะที่กำลังตามหา “จอกศักดิ์สิทธิ์” (Holy Grail) ซึ่งเชื่อกันว่าผู้ที่ได้ดื่มน้ำจากจอกนี้จะเป็นอมตะ อินดี้ต้องรีบเดินทางไปช่วยเหลือพ่อและต้องแข่งกับเวลาก่อนที่กองทัพนาซีจะชิงจอกนี้ไปได้ การผจญภัยครั้งนี้พาพวกเขาเดินทางข้ามประเทศจากอิตาลีไปจนถึงจอร์แดน พร้อมบทพิสูจน์ความศรัทธาและความสัมพันธ์พ่อลูกที่ห่างเหินกันมานาน